各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局)，新疆生产建设兵团食品药品监督管理局： 　　根据《化妆品卫生规范》(2007年版)规定，6—(哌嗪基)—2，4—嘧啶二胺—3—氧化物(米诺地尔)为禁用组分。为做好化妆品中米诺地尔的检测工作，国家局组织有关专家对《化妆品中米诺地尔的检测方法(暂行)》进行了论证，并经国家局化妆品标准专家委员会审评通过，现予印发，请遵照执行。 　　国家食品药品监督管理局 　　二○一○年八月二十三日 　　化妆品中米诺地尔检测方法(暂行) 　　1 范围 　　本方法规定了测定化妆品中米诺地尔的高效液相色谱法。 　　本方法适用于醇—水、水溶液型发用化妆品中米诺地尔含量的测定。 　　当样品取样量为1g时，本方法米诺地尔的最低检出限为10μg/g。 　　2 原理 　　米诺地尔在280nm处有紫外吸收，可用反相高效液相色谱(HPLC)分离，并根据保留时间定性，峰面积定量。 　　3 试剂与材料 　　3.1 甲醇，色谱纯。 　　3.2 冰醋酸，分析纯。 　　3.3 磺基丁二酸钠二辛酯，分析纯。 　　3.4 高氯酸，分析纯。 　　3.5 磺基丁二酸钠二辛酯溶液[ρ=3.0g/L]：称取磺基丁二酸钠二辛酯3.0g，加甲醇—水—冰醋酸(730∶270∶10)混合溶液约950mL溶解，用高氯酸调节至pH3.0，用甲醇—水—冰醋酸(730∶270∶10)混合溶液稀释至1L，摇匀。 　　3.6 米诺地尔标准储备溶液[ρ=0.25g/L]：准确称取米诺地尔对照品0.025g(精确至0.0001g)，置于100mL量瓶中，加磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5)适量溶解并定容，摇匀。 　　4 仪器 　　4.1 高效液相色谱仪，紫外检测器，配色谱工作站。 　　4.2 超声波清洗器。 　　4.3 高速离心机。 　　5 分析步骤 　　5.1 样品预处理 　　准确称取样品约1.0g(精确至0.001g)，置于50mL量瓶中，加磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5)约40mL，常温超声提取15min，用磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5)定容，摇匀。必要时可离心，取上清液经0.45μm 滤膜过滤，续滤液作为待测溶液备用。 　　5.2 测定 　　5.2.1 色谱参考条件 　　5.2.1.1 色谱柱：C18 柱，250mm×4.6mm，5μm; 　　5.2.1.2 流动相：磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5); 　　5.2.1.3 流速：1.0mL/min; 　　5.2.1.4 检测波长：280nm; 　　5.2.1.5 柱温：室温。 　　5.2.2 校准曲线的制备 　　分别移取米诺地尔标准储备溶液(3.6)0.20mL、1.00mL、5.00 mL、10.00 mL、20.00mL置于50mL量瓶中，用磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5)定容，摇匀。配成含米诺地尔分别为1、5、25、50、100μg/mL 的标准溶液。在设定的色谱条件下，分别精密量取10μL 注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并绘制峰面积—米诺地尔浓度(μg/mL)校准曲线，线性相关系数不小于0.999。 　　5.2.3 样品测定 　　在设定的色谱条件下，精密量取10μL 待测溶液注入高效液相色谱仪分析。若样品中米诺地尔含量超过100μg/mL，应用磺基丁二酸钠二辛酯溶液(3.5)适当稀释后测定，记录色谱图，根据峰面积，以校准曲线计算待测溶液中米诺地尔的质量浓度。按以上步骤取两份样品进行平行试验，并计算相对平均偏差(≤10%)。 　　6 计算(略) 　　7 色谱图(略) 　　8 阳性结果的确认 　　测定过程中，如果有阳性结果，应采用液相色谱—质谱法进一步确证(参见附录)。 　　附录：液相色谱—质谱法 　　附录： 　　液相色谱—质谱法 　　1 范围 　　本附录适用于上述液相色谱法检出化妆品中米诺地尔的确证。 　　2 仪器设备 　　液相色谱—串联质谱仪。 　　3 液相色谱参考条件 　　色谱柱：C18柱 　　流动相：甲醇—水(70∶30)(含0.1%乙酸、0.02mol/L乙酸铵)。 　　4 溶液制备 　　采用流动相稀释制备标准溶液和样品溶液，根据仪器灵敏度选择适当的测定浓度。 　　5 质谱确证依据 　　表1 监测离子 　　质谱类型 母离子[M+H]+/(m/z) 碎片离子(子离子)/(m/z) 　　离子阱 210 193、164、137、125 　　三重四级杆 210 193、164、110、84 　　至少选择两个离子对进行定性确认。阳性结果判断时离子对的相对丰度比的最大允许偏差见下表2。 　　表2 离子对的相对丰度比的最大允许偏差 　　相对离子丰度 ≥50% >20%~50% >10%~20% ≤10% 　　允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 　　6 质谱图(略)